Molekulyar diagnostika sohasida polimeraza zanjiri reaktsiyasi (PCR) uzoq vaqtdan beri nuklein kislotalarni aniqlash uchun oltin standart sifatida qabul qilingan. So'nggi yillarda rekombinaza polimeraza kuchaytirilishi (RPA) bilan ifodalangan izotermik kuchaytirish texnologiyalari tezligi, soddaligi va sayt sinovidan-yaroqliligi tufayli tobora ko'proq e'tiborni tortmoqda.
PCR va RPA ham nuklein kislotani kuchaytirish usullari bo'lsa-da, ular ish printsiplari, uskunalar talablari va qo'llash stsenariylarida sezilarli darajada farqlanadi, bu esa har bir texnologiyani turli diagnostika ehtiyojlari uchun mos qiladi.
1. Asosiy tamoyillar: Termal velosiped va doimiy-haroratni kuchaytirish
PCR - bu qisqa vaqt ichida bitta DNK molekulasini millionlab nusxalarga ko'paytirishga qodir biokimyoviy jarayon. Reaktsiya takroriy termal aylanishga tayanadi va uchta asosiy bosqichdan iborat:
1.Denaturatsiya (90–95 daraja) – ikki-torli DNK bitta zanjirga boʻlinadi.
2.Annealing (55-65 daraja) - Primerlar maqsadli ketma-ketliklarga bog'lanadi.
3.Uzaytirish (72 daraja) - DNK polimeraza yangi DNK zanjirlarini sintez qiladi.
Ushbu harorat nazorati ostidagi sikllar- orqali maqsadli DNK yuqori aniqlik bilan eksponent ravishda kuchaytiriladi. Biroq, PCR murakkab termal velosiped asboblarini talab qiladi va odatda 1-2 soat davom etadi.
Bundan farqli o'laroq, RPA 37-42 daraja doimiy haroratda ishlaydi, bu termal tsiklsiz nuklein kislotalarning tez ko'payishini ta'minlaydi. Texnologiya izotermik sharoitlarda yuqori aniq maqsadli kuchaytirishga erishish uchun rekombinaza oqsillari, bir zanjirli DNK-bog'lovchi oqsillar va zanjirli DNK polimerazasini o'zgartirish-ning muvofiqlashtirilgan ta'siriga tayanadi.
RPAda ishlatiladigan DNK polimeraza zanjirning siljish faolligiga ega, lekin 5'→3' ekzonukleaza faolligiga ega emas. Kuchaytirish vaqtida tashqi primerlar shablon ipi bo'ylab cho'ziladi. Ular ichki primerlardan sintezlangan ikki-torli hududlarga duch kelganlarida, polimeraza quyi oqimdagi ipni buzila olmaydi va uning o'rniga yangi kuchaytiruvchi mahsulotlar hosil qilib, uni almashtiradi.
Butun reaksiya doimiy haroratda yakunlanadi, bu murakkab asbob-uskunalarga boʻlgan ehtiyojni yoʻqotadi va haqiqiy -parchalanish va dalada{1}}{2}}oʻtkaziladigan sinovlarni oʻtkazish imkonini beradi. Teskari transkriptazani o'z ichiga olgan holda, RPA RNK nishonini aniqlashda ham qo'llanilishi mumkin.
Kuchaytirish natijalari bir nechta oʻqish formatlari, jumladan, soʻnggi nuqtani aniqlash, real vaqtdagi lyuminestsent monitoringi, lateral oqim tahlillari yordamida tahlil qilinishi va tahlilni ilgʻor ishlab chiqish uchun CRISPR-Cas tizimlari, mikrofluidikalar yoki keyingi{2}}avlodlar ketma-ketligi (NGS) bilan qoʻshimcha integratsiya qilinishi mumkin.
Ilova stsenariylari: Laboratory Precision va.-Siteda tezkor sinov
PCR eng qimmatli molekulyar diagnostika texnologiyalaridan biriga aylandi va nuklein kislota sinovlari uchun oltin standart bo'lib qolmoqda.
Yuqori aniqligi, iqtisodiy samaradorligi va miqyosi-bo‘lishi tufayli PCR klinik diagnostika, markazlashtirilgan laboratoriyalar, tadqiqot muassasalari va infratuzilma va o‘qitilgan xodimlar tayyor bo‘lgan-ko‘lamli skrining dasturlarida keng qo‘llaniladi.
RPA esa tez,{0}}saytda diagnostika qilishda aniq afzalliklarni taqdim etadi. Kuchaytirish 20 daqiqada tugallangani, minimal jihoz talablari va oddiy ishlashi bilan RPA juda mos keladi.
- Birlamchi tibbiy yordam va favqulodda vaziyatlar sozlamalari
- Bojxona va chegara nazorati
- Hayvonlar va o'simliklar kasalliklarini dala skriningi
- Atrof-muhit va oziq-ovqat xavfsizligi sinovlari
Portativ qurilmalar va lateral oqim chiziqlari bilan birlashtirilganda, RPA an'anaviy laboratoriyalardan tashqari tez va ishonchli molekulyar testlarni o'tkazish imkonini beradi.
MIRA (Ko'p fermentli izotermik tez kuchaytirish)Bu Amp Future kompaniyasining xususiy izotermik kuchaytirish texnologiyasidir. U RPA bilan bir xil texnik oilaga tegishli bo'lib, doimiy haroratda nuklein kislotaning tez ko'payishiga erishish uchun bir nechta funktsional fermentlardan foydalangan holda tabiiy DNK rekombinatsiyasi va ta'mirlash mexanizmlaridan ilhomlangan.
MIRA quyidagi imkoniyatlarni yaratish uchun beshta asosiy ferment, jumladan helikaz, rekombinaza, bir zanjirli DNK-bog'lovchi oqsil va DNK polimerazadan iborat muvofiqlashtirilgan tizimdan foydalanadi:
- Keng ish harorati oralig'i: 25-45 daraja
- Tez kuchaytirish: 20 daqiqa ichida natijalar
- Yuqori sezuvchanlik va o'ziga xoslik
- Kengaytirilgan xavfsizlik va ifloslanish xavfini kamaytirish
MIRA — nuklein kislotani kuchaytirish texnologiyasi boʻlib,{0}}joyida va-tutqich tekshiruvi- uchun maxsus moʻljallangan.
MIRA platformasiga asoslanib, Amp Future tezkor molekulyar POCT uchun mahsulotlarning keng qamrovli portfelini ishlab chiqdi, jumladan:
Nuklein kislotani tez ajratuvchi agent:
Kuchaytiriladigan nuklein kislota xona haroratida 5 minut ichida olinadi; 50 mL gacha namunani to'liq yuklash imkonini beruvchi past inhibisyon; xona haroratida tashish va saqlash, yorug'likdan himoya qilish shart emas.
Izotermik nuklein kislota kuchaytiruvchi reagent:
Kuchaytirish 5-20 daqiqada yakunlandi, tez va samarali; turli xil reagent shakllari (liyofillangan kukun, liyofillangan mikrosferalar va boshqalar); turli xil natijalarni taqdim etish usullari (elektroforez, floresans, test chiziqlari).
Miniatyuralashtirilgan portativ qurilmalar:
Raqamli izotermik detektorlar, cho'ntak{0}}o'lchamdagi sinov asboblari, bir qo'lda osongina ushlab turiladigan, quvvat banki bilan jihozlangan bo'lib, sizni laboratoriya cheklovlaridan xalos qiladi va nuklein kislotasini aniq sinovdan o'tkazish imkonini beradi.
Yagona/Ko‘p sinov chiziqlari:
Yaxshiroq moslik uchun MIRA metodologiyasi asosida optimallashtirilgan; MIRA texnologiyasi bilan birlashtirilib, qulaylikni ta'kidlaydi.
To'liq avtomatlashtirilgan nuklein kislota kuchaytirgichi:
To'liq avtomatlashtirilgan aniqlash uchun faqat bitta namunani yuklash operatsiyasini talab qiladi; aniqlash chegarasi bir nusxagacha; izotermik kuchaytirish va avtomatik yopish ifloslanish xavfini kamaytiradi.
-Site Rapid Testing paketida:
Istalgan vaqtda, istalgan joyda-spot test-barchasi bitta paketda; testni 30 daqiqada aniq va sezgir yakunlaydi.
Qo'shimcha mahsulot haqida ma'lumot yoki echimlar uchun biz bilan bog'laning.