Bu yerda 20 daqiqa ichida ASFV ni aniqlaydigan tezkor va ekstraksiyasiz diagnostika platformasi boʻlgan sCRAM (suboptimal protospacer qoʻshni motif (PAM)-vositalangan CRISPR RNK va Cas12a nukleazasi, koʻp fermentli izotermik tez kuchaytirish) ni oʻrnating. sCRAM nuklein kislotaning tez ajralib chiqish bosqichini (40 daraja, 5 min) bir-koʻp fermentli izotermik kuchaytirish (MIRA) va suboptimal PAM vositachiligida CRISPR/ni birlashtiruvchi bir naychali reaksiya bilan birlashtiradi.
Cas12a tizimi (37 daraja, 15 daqiqa), UV nurlari yoki lateral oqim chiziqlari (LFS) orqali asbob-bepul vizual o‘qish imkonini beradi.sCRAM bir nusxani aniqlash sezgirligini namoyish etadi va beshta keng tarqalgan cho‘chqa patogenlari (PRRSV, PCV, JPR) bilan o‘zaro reaktivlik ko‘rsatmaydi (PRRSV, PCV, JPR). 111 ta simulyatsiya qilingan va klinik namunalarni (shu jumladan qon, plazma va tamponlarni) baholash ultrabinafsha nurlanishini o'qish uchun qPCR bilan 100% va LFS uchun 98,20% muvofiqligini aniqladi.
o'qish, ikkala usul ham 100% o'ziga xoslikni ko'rsatadi. sCRAM ning soddaligi, tezligi va maydonga moslashishi uning cheklangan resurslar- sozlamalarida markazlashtirilmagan ASFV kuzatuvi imkoniyatlarini ta'kidlab, epidemiyani oldini olish uchun kuchli vositani taklif etadi.
Ushbu tadqiqotda biz suboptimal PAM vositachiligidagi CRISPR/Cas12a-koʻp fermentli izotermik kuchaytirish bilan integratsiyalashgan{0}}tezkor va dalada joylashtiriladigan ASFV aniqlash platformasi sCRAMni yaratdik. Tahlil 20 daqiqa ichida bir{4}}1 nusxada 1 nusxa/uL sezgirlikka erishadi va asosiy cho'chqa patogenlari bilan o'zaro-reaktivlikni ko'rsatmaydi. Qon, plazma va tampon namunalari bo'yicha klinik tekshirish ultrabinafsha nurlarini o'qish yordamida qPCR bilan to'liq muvofiqligini va lateral oqim chiziqlari orqali 98,20% aniqlikni ko'rsatdi. Soddalashtirilgan operatsiya, yuqori sezuvchanlik va o'ziga xoslik va vizual natijalarni talqin qilish bilan sCRAM saytdagi ASFV kuzatuvi va-diagnostika ilovalarining kengroq-- uchun kuchli imkoniyatlarini taklif etadi.
