"Roman Kasp13a / Cas12a-vositachiligining rivojlanishi"Bir pot" ikki tomonlama genetik o'zgartirilgan ekinlar ekspressligi uchun diskni aniqlash
Genetik ravishda o'zgartirilgan ekinlar butun dunyo bo'ylab keng qamrovli ekinlar ekilgan va ko'plab davlatlar genetik ravishda o'zgartirilgan ekinlarning xavfsizligini ta'minlash bo'yicha normativ choralarini asta-sekin yaxshilashmoqda. Saytning tezkor va aniqligini rivojlantirish qishloq xo'jaligi va biosiye uchun juda muhimdir va genetik ravishda o'zgartirilgan mahsulotlar to'g'risida jamoatchilik bilan bog'liq tashvishlarni engillashtirishi mumkin.
Ushbu tadqiqotda tadqiqot guruhi genetik ravishda o'zgartirilgan ekinlarni bir vaqtning o'zida genetik ravishda o'zgartirilgan ekinlarni bir vaqtning o'zida o'tkazib yuborishi va genetik jihatdan o'zgartirilgan ekinlarni aniqlash uchun oddiy va samarali aniqlash usulini bir vaqtning o'zida aniqlash usulini yaratdi.
Eksperimental usullar
Mira ikki tomonlama mahsuloti Kas13a va Cas12a ikki tomonlama tizimi tomonidan tahlil qilinadi, shunda dum-kanal o'qilishi uchun yorug'lik vositasi yoki ikki t telefon orqali o'qiladi. Butun jarayon 35 daqiqadan kam vaqt ichida yakunlanadi, uni aniqlash chegarasi 20 nusxada past.
(MR-DCA-ni Camv35s va NOS) aniqlash printsipasi
Butun tajriba uchta bosqichga bo'linadi: Mira kuchaytirish, inqirozni kuchaytirish, reaktsiya va natijani izohlash usullari.
Camv35s geni Kas13a nishoni sifatida ishlatiladi va NOS geni Cas12a-ning nishoni sifatida ishlatiladi. Ikki juft masihiylarning ikki jufti mos ravishda ishlab chiqilgan. CAS13a tizimi RNNni faqat oldinga yo'naltiradi, shuning uchun oldinga intader priver mintaqasi ishlab chiqilgan, unda keyingi transkripsiya va Kas13a faollashtirish uchun T7 targ'ibotini o'z ichiga oladi. NOS geniga pam qo'shiladi. Yuqoridagi qo'shimcha qo'shimchalar ikkala Kas13a va Cas12a oqsillari ularning krR'onlarini bog'lashi mumkinligini ta'minlaydi va ikkala tizim o'rtasida hech qanday aralashuv yoki o'zaro ta'sir bo'lmaydi.
Eksperimental vaziyat
Sezgirlik va o'ziga xoslik
Namuna mo''ta reaktsiyasining floreonesecenceenceenziyenni sinab ko'rish uchun gradientda suyultirildi. Florecenceenceenzenzenzenzenzenziya hali ham 20 mkl ansoyalarida aniqlanishi mumkinligi aniqlandi. 20 mkl kontsentratsiyasi tajriba uchun nihoyat tanlandi.
(Turli xil namuna kontsentratsiyasi va test chiziqlari ranglarni rivojlantirish va intensivlashtirish miqdorini hisoblash uchun ishlatiladi)
MR-DCAning o'ziga xosligini yanada baholash uchun tadqiqot guruhi transgenik bo'lmagan hayvonlar va transform bo'lmagan o'simliklarning aralash namunalarini sinovdan o'tkazdi. Natijalar shuni ko'rsatdiki, faqat Camv35s va Nos o'z ichiga olgan transgenli namunalari yuqori floreonesencite signallari bor edi, ammo boshqa namunalarning shkafi salbiy nazoratning eng yaqinligi bilan bog'liq. Janob DCA-dan aniq ikki tomonlama nuklein kislotasi platformasi sifatida foydalanish mumkin.
MR-DCA 24 ekin namunalari sinovdan o'tkazildi. Ular orasida 1, 2, 15, 16, 21 va 22 yoshli Camv35s targ'ibotchisi bo'lgan transgenik makkajo'xori. 7, 8, 23 va 24 - bu noos terminatori bo'lgan kasalliklarga chidamli transgeniya guruch. 3, 4, 11, 12, 13, 17, 17 va 18 va 18 va 18 yoshli Camv35s targ'ibotchisi va noos terminatori bo'lgan transgeniyalar.
(24 ta namunaning sinov natijalari)
Tez reaktsiya
Reaktsiya vaqti saytda aniqlashning muhim omilidir. Tadqiqot guruhi Fam va Hexning floreekence signallari, reaktsiya vaqti 10 daqiqa bo'lganida frigence asbobi tomonidan aniqlanishi mumkin. Mira Crispreati reaktsiyasi bilan birlashtirilgan, 15 daqiqadan keyin sariq florecencececencecesenda ham kuzatildi.
(Har xil Miraning reaktsiya paytida floresan signali)
(Har xil Miraning reaktsiya davrlarida test stsenarchasini va intensivlashtirish miqdorini hisoblash)
Eksperimental xulosa
Eksperimental natijalarga ko'ra, oqimning o'ziga xos xususiyatiga ega ekanligini va Camv35 va NOS ning kuchaytirilgan mahsulotlarini aniqlab olishi mumkinligini ko'rsatdi. Cas13a va Cas12a tizimlari bir-biriga xalaqit bermasdan mustaqil ravishda reaktsiya qilishadi. Janob DCA testi, maydonda genetik ravishda o'zgartirilgan ekinlarni aniqlashda juda katta qiymatga ega bo'lgan 35 daqiqada 20 nusxani aniq aniqlaydi.
Maqola ma'lumotlari
Jurnal nomi: "Kengaytirilgan tadqiqot ekspress
Maqola sarlavhasi: "Roman Kasp13a / Cas12a-Cas12a-Mediatsiya qilingan" Bir-qozonni ishlab chiqish "Bir-qozonni ishlab chiqish" Bir nechta qozonni "genetik o'zgartirilgan ekinlar
Ta'sir omillari: 11.4
Tadqiqot guruhi: Vang Siaofu, Jejingg qishloq xo'jalik fanlari akademiyasi