Virusli nuklein kislotalarning iz miqdori uchun signal kuchaytirilishiga erishish va Cas14a uchun etarli substratlarni ta'minlash uchun biz MIRA asosida aMIRA (assimetrik ko'p fermentli izotermik tez kuchaytirish) ishlab chiqdik. Olingan aMIRA-Cas14a tizimi quyidagi asosiy afzalliklarni taqdim etadi:
1. Optimallashtirilgan primer stokiyometriyasi MIRA ga Cas14a uchun to'g'ridan-to'g'ri substrat bo'lib xizmat qiluvchi ssDNKni afzal ko'rish imkonini beradi. Oldinga{3}}orqaga{4}}primer nisbatini 20:1 ga sozlash orqali tizim Cas14a ning PAM-mustaqil ajralish faolligini faollashtirish uchun yetarlicha ssDNK hosil qiladi, u ssDNKni aniq taniydi va parchalaydi.
2. MIRA va CRISPR-Cas14a ning bir qozon integratsiyasi oʻzaro kontaminatsiya xavfini yoʻq qiladi.
3. MIRA aniqlash sezuvchanligini sezilarli darajada oshiradi, bu juda kam miqdordagi virusli nuklein kislotalarni aniqlash imkonini beradi.
4. aMIRA-Cas14a o‘ziga xos bo‘lmagan kuchaytirish natijasida kelib chiqadigan noto‘g‘ri musbatlardan qochib, yuqori o‘ziga xoslikni saqlaydi.
Oxir oqibat, MIRA va CRISPR-Cas14a ning bir qozon integratsiyasi ifloslanish xavfini bartaraf qiladi va MIRAning kuchli tomonlari va CRISPR-Cas14a tizimi o‘rtasida mukammal sinergiyaga erishadi. Bu MaC14a platformasining asosiy texnologik yutug‘ini ifodalovchi izotermik kuchaytirish va CRISPR tizimlari o‘rtasidagi nomuvofiqlik muammosini hal qiladi. aMIRA-Cas14a tizimi sezgirlikni 1000 baravar oshirishga erishadi va shu bilan birga maxsus kuchaytirishni ta'minlaydi. Cas14a ning ketma-ketlikka xos tan olinishi bilan birgalikda, bu maqsadli bo'lmagan viruslar yoki sog'lom namunalarga qarshi o'zaro reaktivliksiz, ikki qatlamli o'ziga xoslikni tekshirishni ta'minlaydi-boshqa sohadagi og'riqli nuqta: noto'g'ri pozitivlarga moyillik.
Ushbu tadqiqotda ishlatiladigan MIRA multifermentli izotermik tez kuchaytiruvchi reagentlar Amp‑Future (Changzhou) Biotech Co., Ltd tomonidan taqdim etilgan. Amp‑future Biotech kompaniyasi reagentning mukammal ishlashidan tashqari, professional va tez javob beradigan texnik yordam guruhini ham taklif etadi.
MIRA tadqiqot va diagnostika ilovalari uchun ishlab chiqilgan sentrifuga{0}}asosidagi mikrosuyuqlik chiplari bilan kuchli muvofiqligini namoyish etadi:
1.Mikrosuyuq mikrosxemalar uchun xos bo'lgan mikro-hajmli reaksiya kameralari uchun moslashtirilgan miniatyuralashtirilgan reaksiya tizimi;
2.Bir ishda ko'p tomonlama aniqlash qobiliyati;
3. Portativ qurilmalar bilan moslik, namunadan natijagacha silliq ish oqimlari.
Biz . 4A-rasmda koʻrsatilganidek, dalada joylashtirish uchun optimallashtirilgan{2}}parchalanish testi (POCT) qurilmasining integratsiyalangan “namuna{0}}kirish, javob-chiqish” nuqtasini yaratdik. Yilni prototip (23 sm (L) × 21 sm (W) × 14 sm (H), 12,5 kg umumiy massa) ajoyib portativlikka erishadi. Tizimning asosiy qismlariga aylanishni aniq boshqarish uchun yuqori aniqlikdagi servo motor va haroratni tartibga solish uchun havo isitish moslamasi kiradi. Chip ostida joylashgan o'rnatilgan optik aniqlash moduli floresan qo'zg'alish va o'lchashni osonlashtiradi va aniqlashda yuqori sezuvchanlik va aniqlikni ta'minlaydi. Portativ qurilma oʻrnatilgan Android operatsion tizimi bilan jihozlangan boʻlib, foydalanuvchilarga qulay interfeysni taklif etadi-bu yerda operatorlar reaksiya vaqti va harorat kabi batafsil parametrlarni oʻz ichiga olgan oldindan dasturlashtirilgan operatsion fayllarni tanlashi mumkin. Natijalar va xulosalar LCD displeyda real vaqt rejimida-ko‘rsatiladi, bu esa tezkor ma’lumot olish imkonini beradi. Bundan tashqari, tizim sinov natijalarini darhol sharhlash va tahlil qilish uchun sun’iy intellekt algoritmlari bilan integratsiyalashgan, mobil qurilmalar yoki bulut serverlariga real vaqtda ma’lumotlarni uzatishni qo‘llab-quvvatlaydigan simsiz aloqa modulini o‘z ichiga oladi.
